無菌室浮遊菌測試操作規程

1  範圍：

    本標準規定了醫藥工業無菌室和潔淨區中浮遊菌的測試條件和測試方法。

    本標準適用於醫藥工業無菌室和潔淨區，無菌室或局部空氣淨化區域（包括潔淨工作台）的浮遊菌的測試和環境的驗證。

2  引用標準：GB/T 16293.2010

    藥品生產管理規範（1998修訂）附錄。

3  標準

4  測試方法

4.1  方法提要

本標本采用的方法是計數濃度法。即通過收集懸遊在空氣中的生物性粒子於專門的培養基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養基），經若幹時間和適宜的生長條件下讓其繁殖到可見菌落計數，以判定該潔室的微生物濃度。

4.2人員的職責及培訓

無菌室的測試人員應進行本專業的培訓並獲得相應的資格後才能才能履行對無菌室測試的職責，其中包含涉及的衛生知識和基本的微生物知識。

無菌室的測試人員應選擇與生產操作的空氣潔淨度級別要求相適應的穿戴方式，外麵的衣服不能帶進100000級以上的區域。

4.3  儀器、輔助設備和培養基

選擇合適的浮遊菌采樣器，包括采用無油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養基表麵的水分布被吹幹。

本測試需要具備儀器、輔助設備和培養基如下：

a) 浮遊菌采樣器；

b) 培養皿；

c) 高壓消毒鍋；

d) 培養基；

e) 恒溫培養箱；  

4.4  浮遊菌采樣器原理

浮遊菌采樣器一般采用撞擊法機理，可分為夾縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。夾縫式采樣器由內部風機將氣流吸入，通過采樣器的夾縫式平板，將采集空氣噴射並撞擊到緩慢的平板培養基表麵，附著的活微生物粒子經培養後形成菌落。離心式采樣器由於內部風機的高速旋轉，氣流從才樣器的前部進入後部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固型培養條上，附著活的微生物粒子經培養後形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過一個金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經過機械加工的特製小孔，通過風機將收集到的細小的空氣直接撞擊到平板培養基表麵，附著的活物微生物粒子經培養成型後形成菌落。

4.5  測試要點

4.5.1  必須按照儀器的檢定周期，定期對測試儀器作檢定。應使用檢定合格，並且使用有效期內的儀器。

4.5.2  測試儀器未進入被測區域時，若必需，則先清洗表麵吧，或在相應的無菌室內準備和存放（用保護罩或其他適當地外罩保護儀器）。

4.5.3  在100級無菌室內用紙時，上麵應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級的無菌室內不能用鉛筆的橡皮。

4.5.4  使用測試儀器時應嚴格按照說明書操作。

4.5.4.1  儀器開機，預熱到穩定後，方可按說明書的規定對儀器進行校正，同時檢查采樣流量，並根據采樣量設定時間。

4.5.4.2   采樣口必須用使用便於消毒及化學性能穩定的材料製造。

4.5.4.3  采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。

4.5.4.4   采樣管的長度應根據測點的高度定，盡量減少彎曲。

4.6   培養皿

4.6.1  一般采用φ90mm×15mm規格的培養皿。可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿。

4.6.2離心式采樣器采用專用的固型培養條

4.7  培養基

     大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或其他用戶認可並經驗證的培養基。

4.8 恒溫培養箱

    必須定期對恒溫培養箱進行效驗

4.9  測試步驟；

4.9.1  測試前儀器、培養皿表麵必須嚴格消毒。

4.9.1.1  采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用於100級無菌室的采樣器

宜預先放在被測房間內。

4.9.1.2  用消毒劑擦淨培養皿的外表麵。

4.9.1.3  采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外麵，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。

4.9.1.4  采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉並晾幹。

4.9.1.5  采樣者應穿戴與被測潔淨區域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或帶無菌手套操作。

4.9.1.6 采樣儀器經消毒後先不放入培養皿，開啟浮遊菌采樣器，使儀器中的殘餘消毒劑蒸發，時間不少於5min，並檢查流量並根據采樣量調整設定時間。

4.9.1.7 關閉浮遊采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。

4.9.1.8 置采樣口於采樣點後，開啟浮遊菌采樣器進行采樣。

4.10  培養

4.10.1  全部采樣結束後，將培養皿倒置於恒溫培養箱中培養。

4.10.2  采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配製的培養經采樣後，在30℃～35℃培養箱中培養，時間不得少於2d；采用沙氏培養基(SDA)配製的培養皿經采樣後，在20℃～25℃培養箱中培養，時間不少於5d。

4.10.3每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染。可每批選定3隻培養皿作對照培養。

4.11  菌落計數

4.11.1  用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然後用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.11.2  若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辯時仍以2個或2個以上菌落計數。

4.12  注意事項

4.12.1 使用前應仔細檢查每個培養皿質量，培養基及培養皿有變質、破損或汙染的不能用使用的。

4.12.2 對培養基、培養條件及其他參數作詳細記錄。

4.12.3 由於細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光於培養皿麵或真麵仔細觀察，不要有遺漏計培養皿邊緣生長的菌落，並須要菌菌落或培養基沉澱的物區別，必要時用顯微鏡鑒別。

5  測試規則

5.1 測試條件

在測試之前要，要對無菌室相關參數進行預先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環境條件，例如：這種預先測試或可包括：

a)  溫度和相對濕度的測試。  無菌室的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適

應（無特殊要求時，溫度控製在18℃～26℃，相對濕度控製在45%～65%之間為宜）。同時滿

足測試儀器的使用範圍；

b)  室內送風量或風速的測試的測試，或壓差的測試；

c)  高效過濾器的泄漏測試

5.2  測試狀態

    靜態和k8凯发天生赢家一触即发人生兩種狀態均可進行測試。

靜態測試時，室內測試人員不得多於2人

浮遊菌測試前,被測定無菌室(區)由用戶決定是否需要預先消毒.

    浮遊菌測試時應標明測試時所采用的狀態和室內測試人員數。

5.3  測試時間

5.3.1  在空態或靜態a測試時，對單向流無菌室而言，測試宜在淨化空氣調節係統正常運行時間不少於10min後開始。對非單向流無菌室，測試宜在淨化係統正常運行時間不少於30min後開始。在靜態b測試時，對單向流潔淨是（區），測試宜在生產操作人員撤離現場並經過10min自淨後開始；；對非單向無菌室，測試宜在生產操作人員撤離現場並經過20min自淨後開始。

5.3.2  在k8凯发天生赢家一触即发人生測試時，則須記錄生產開始的時間以及測試時間。

5.4.浮遊菌濃度的計算