潔淨度（沉降菌）的檢驗標準操作規程

1 目的

   建立潔淨度（沉降菌）的檢驗標準操作規程，為沉降菌檢查人員提供正確的標準操作方法。

2 範圍

適用於本公司潔淨度（沉降菌）檢查的全過程。

3 責任

QA對本規程的有效執行承擔監督檢查責任，QC對本規程的實施負責。

4 程序

4.1概述：本標準對塵粒及微生物汙染規定需進行環境控製的房間或區域。其建築結構、裝備及其使用均具有減少對該區域內汙染源的介入、產生和滯留的功能。

4.2測試方法

4.2.1方法提要：

     本標準按國家技術監督局發布的《醫藥工業潔淨室（區）沉降菌的測試方法》，采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子於培養基平皿，經若幹時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔淨環境內的活微生物數，並以此來評定潔淨室（區）的潔淨度。

4.2.2儀器

     儀器包括：培養皿、培養基、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器。

4.2.2.1培養皿

       一般采用f90mm×15mm規格的培養皿。

4.2.2.2培養基

       大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或用戶認可並經驗證了的培養基。

4.3測試前的規則：

4.3.1測試狀態；

4.3.1.1沉降菌測試前，被測試潔淨室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控製在規定值內。潔淨室（區）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18℃～26℃，相對濕度在45%～65%之間為宜），同時應滿足測試儀器的使用範圍。

4.3.1.2沉降菌測試前，被測試潔淨室（區）已經過消毒。

4.3.1.3測試狀態有靜態和k8凯发天生赢家一触即发人生兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，並在報告中注明測試狀態。

4.3.1.4靜態測試時，培養皿暴露時間為30min以上；k8凯发天生赢家一触即发人生測試時，培養皿暴露時間為不大於4h。

4.3.2測試人員：

4.3.2.1測試人員必須穿戴符合環境潔淨度級別的工作服。

4.3.2.2靜態測試時，室內測試人員不得多於2人。

4.3.3測試時間：

4.3.3.1對單向流，如100級淨化房間及層流工作台，測試應在淨化空調係統正

常運行不少於10min後開始。

4.3.3.2對非單向流，如B級、B級以上的淨化房間，測試應在淨化空調係統正常運行不少於30min後開始。

4.3.4注意事項：

4.3.4.1測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。

4.3.4.2采取一切措施防止人為對樣本的汙染。

4.3.4.3對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

4.3.4.4由於細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光於培養皿背麵或正麵仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，並須注意細菌菌落與培養基沉澱物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。

4.3.4.5采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或汙染的應剔除。

4.3.4.6對於單向流潔淨室（區）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對於非單向流（區），采樣口向上。

4.3.4.7布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口；采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側，並盡量少走動。

4.3.4.8培養皿在用於檢測時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然後與采樣後的培養皿（TSA或SDA）一起放入培養箱內培養，結果應無菌落生長。

4.4測試步驟：

4.4.1采樣方法：

4.4.1.1儀器和用具：培養皿。

4.4.1.2方法：

a采樣點一般在離地麵0.8m高度的水平麵上均勻布置。

b采樣點多於5點時，也可以在離地麵0.8m～1.5m高度的區域內分層布置，但每層不少於5點。

c打開培養皿蓋，使培養基表麵暴露0.5h，再將培養皿蓋蓋上後倒置。

                            最少采樣點數目

最少培養皿數

4.4.2培養：

4.4.2.1儀器和用具：培養箱、天平（萬分之一）、稱量紙、錐形瓶（1000ml、150ml）、量筒（1000ml）、高壓蒸汽滅菌鍋。

4.4.2.2培養基：

4.4.2.2.1大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）：

a） 成分：酪蛋白胰酶消化物 15g    大豆粉木瓜蛋白酶消化物  5g    氯化鈉  5g    瓊脂  15g    純化水   1000ml

b） 製法：取上述成分除瓊脂，混合，微熱溶解，調節pH值使滅菌後為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化後，分裝，滅菌，冷卻至約60℃，在無菌操作要求下傾注約20ml至無菌平皿（f90mm）中。加蓋後在室溫放至凝固。

4.4.2.2.2沙氏培養基（SDA）：

     a）葡萄糖   40g    酪蛋白胰酶消化物、動物組織的胃酶消化物等量混合  10g     瓊脂  15g      純化水   1000ml

b）製法：取上述成分除瓊脂，混合，微熱溶解，調節pH值使滅菌後為5.6±0.2，加入瓊脂，加熱溶化後，分裝，滅菌，冷卻至約60℃，在無菌操作要求下傾注約20ml至無菌平皿（f90mm）中。加蓋後在室溫放至凝固。

4.4.2.3方法：全部采樣結束後，將培養皿倒置於恒溫培養箱中培養，采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配製的培養皿在30～35℃培養箱中培養，時間不少於2天；采用沙氏培養基（SDA）配製的培養皿在20～25℃培養箱中培養，時間不少於5天。每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染。可每批選定3隻培養皿作對照培養。

4.4.3菌落計數：

4.4.3.1用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然後用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.4.3.2若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。

4.4.4結果計算：

4.4.4.1用計數方法得出各個培養皿的菌落數。

4.4.4.2平均菌落數的計算，見式。

                             M1+M2+…+Mn   

平均菌落數M=   

                                 n

式中 M—平均菌落數；

               M1—1號培養皿菌落數；

               M2—2號培養皿菌落數；

               Mn—n號培養皿菌落數；

               n—培養皿總數。

4.4.5結果評定：

     用平均菌落數判斷潔淨室（區）空氣中的微生物。

4.4.5.1潔淨室（區）內的平均菌落數必須低於所選定的評定標準。

4.4.5.2在靜態測試時，若某潔淨室（區）內的沉降菌平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然後重新采樣兩次，測試結果均須合格。